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精液的处理方法

作者:陈振文 来源:人民卫生出版社 2015-08-28 17:20:57

核心提示: 1.3 精液的处理方法1.3.1 精子参数与辅助生殖技术方法的选择 辅助生殖技术(ART)是男性不育治疗的重要手段,不同授精方式有其各自的指征,应在客观评估男性生育能力的基

      1.3 精液的处理方法Ehf试管婴儿网

1.3.1 精子参数与辅助生殖技术方法的选择  Ehf试管婴儿网

辅助生殖技术(ART)是男性不育治疗的重要手段,不同授精方式有其各自的指征,应在客观评估男性生育能力的基础上,严格按照卫生部技术规范实施。从一般原则上来说,应首先考虑侵入性低的方法,IUI和体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer ,IVF-ET,其次才选择ICSI、植入前遗传学诊断(pre-implantation genetic diagnosis ,PGD)等风险大、费用高的技术。  Ehf试管婴儿网

当前,评估男性生育能力最主要的方法是精液常规分析,根据得到的精子浓度、前向运动精子百分率、形态学等参数,结合女方因素进行综合分析制订预案,最终还要依据精液处理后回收的前向运动精子总数来确定最合适的治疗方案。  Ehf试管婴儿网

对于轻中度的少弱畸形精子症,通常可考虑采用IUIIVF-ET治疗;重度少弱畸形精子症则需要考虑IVFICSI治疗;极度少、弱或畸形精子症(精子浓度< 1× ,前向运动百分率<1% ,或正常形态率<1%,常常只能采用ICSI治疗。  Ehf试管婴儿网

1.3.2 精液处理的方法与选择  Ehf试管婴儿网

常用的精液处理方法包括密度梯度离心法:(density-gradient centrifugation ,DGC)、 上游法(swin-up)和简单洗涤法(simple washing)等,处理方法的选择主要取决于精液标本的质量。对于精子浓度和活动率大致正常的精液通常建议采用直接上游法,而在严重少、弱或畸形精子症情况下,采用密度梯度离心法更好,因为可以回收到更多的活动精子 。  Ehf试管婴儿网

1.3.3 密度梯度离心  Ehf试管婴儿网

密度梯度离心借助活动精子的运动能力和各类细胞的密度差异来分离精了使精子在试管底部形成松软的沉淀,可得到质量良好的精子,没有细胞、不成熟生殖细胞等污染。与上游法相比,操作更容易标准化,精子回收率也较高,常用于IVF/ICSI精液标本的制备。最常用的是由40% 的上层和 80% 的下层组成的两层密度梯度离心方法。  Ehf试管婴儿网

(一)试剂  Ehf试管婴儿网

1)添加了HSA的培养基,BWWEarleHTF等。 Ehf试管婴儿网

2)等渗密度梯度培养基:向10× 浓缩培养基10ml中添加密度梯度培养基90ml,HSA 300mg ,丙酮酸钠3mg ,60% 乳酸钠溶液0.37ml 以及碳酸氢钠200mg  Ehf试管婴儿网

380% 梯度液 向40ml 等渗透压梯度培养基中添加10ml 培养基。  Ehf试管婴儿网

440% 梯度液 向20ml等渗透压梯度培养基中添加30ml 培养基。  Ehf试管婴儿网

(二)步骤  Ehf试管婴儿网

1)将80% 密度梯度培养基1ml加于离心管中,然后小心地将40% 密度梯度培养基1ml加在液面之上。Ehf试管婴儿网

2)充分混合精液标本,1ml精液小心地加在40% 密度梯度培养基液面之上,精液体积大时可使用多个离心管。  Ehf试管婴儿网

3)离心300g×15min ,优质的精子将集中于试管的底部。  Ehf试管婴儿网

4)轻轻吸出精子沉淀,重新悬浮于5ml 培养基中,离心200g×10min 以除去残余的密度梯度培养基。Ehf试管婴儿网

5)用5ml培养基重复洗涤一遍。  Ehf试管婴儿网

6)将精子沉淀重新悬浮于适量培养基中备用,并测定精子的浓度和活动率。  Ehf试管婴儿网

1.3.4 直接上游法  Ehf试管婴儿网

直接上游法利用精子自身的运动能力将活动精子从精液中分离出来,可以获得活动力良好的精子, 比较适用于活动精子百分率较低的精液标本,常用与IVFICSI的精液标本处理。  Ehf试管婴儿网

(一)试剂 Ehf试管婴儿网

添加了HSA的培养基,BWWEarleHTF等。  Ehf试管婴儿网

(二)步骤  Ehf试管婴儿网

1)充分精液混匀标本。  Ehf试管婴儿网

2)将1ml精液置于试管底部,在液面上方添加1.2ml培养基,或者小心地将1ml精液加到1.2ml培养基下方,注意保持液体的分界面。  Ehf试管婴儿网

3)将试管倾斜45˚,37 孵育60分钟。  Ehf试管婴儿网

4)轻轻将试管恢复直立,将最上边1ml 培养基转移至另一支试管,1.52 ml培养基稀释。  Ehf试管婴儿网

5)离心300g×5min ,弃上清液。  Ehf试管婴儿网

6)将沉淀重新悬浮于适量培养基中备用,并分析精子浓度和活动率。  

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