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精子的冷冻保存

作者:孙正怡 来源:人民卫生出版社 2015-08-22 14:32:15

核心提示: 1.6 精子的冷冻保存精子比胚胎能更好地耐受冷冻。精子结构相对简单,表面积/体积比大,对水的渗透性强,很容易在含冷冻保护剂的冷冻液中达到渗透平衡。精子内主要成分是高度凝集

 1.6 精子的冷冻保存kMW试管婴儿网

精子比胚胎能更好地耐受冷冻。精子结构相对简单,表面积/体积比大,对水的渗透性强,很容易在含冷冻保护剂的冷冻液中达到渗透平衡。精子内主要成分是高度凝集的DNA,细胞质极少,含水分也少,不易形成冰晶。另外由于精子易于获得,而且数量大,冷冻复苏过程中,即使有部分损失,剩余精子通常也可以满足治疗需要。也正因为如此,各中心对精子冷冻技术的研究投入很少,多年来改进不大。虽然人们对精子冷冻保存的研究非常早,已经有近300年历史,但直到1949Ploge等发现甘油能够作为冷冻保护剂以后,精液的冷冻储存才真正实用化。20世纪60年代后,随着精子冷冻技术的成熟,世界范围内建成多家精子库。kMW试管婴儿网

(一)精子冷冻保存的意义kMW试管婴儿网

用于那些取精困难的患者。预先冷冻精子可以减少取卵日当天男方的取精压力。由于大部分提前冷冻精子的患者都能在取卵日取出新鲜的精子用于卵子受精,所以这些冷冻的精子通常仅做备份。kMW试管婴儿网

1)精子库:为不能提供精子的不育夫妇进行供精人工授精或供精体外受精治疗。2001年我国卫生部出台精子库的相关法规,精子库的设立要经过卫生部的审批。对于捐赠的精子,捐赠者必须满足一定的客观条件,而且通过冷冻技术冷冻保存6个月精子,直到捐赠者病毒筛査试验结果为阴性,方可使用。kMW试管婴儿网

2对干拟接受他人赠卵的患者,可以冷冻接受方的男性精子,这样在有合适供卵时直接受精,可以减少赠卵人与受卵人双方的见面机会,更好地保证卫生部双盲的要求,并为男性患者带来更多的方便。kMW试管婴儿网

3对于少精、弱精者,可以采用分次射精冷冻保存后,统一复苏后混合处理的方法进行人工授精(集精人工授精),但以目前的实践结果来看,多数采用这种方法的研究,人工授精成功率并没有明显改善。kMW试管婴儿网

4保存男性生育能力。在癌症治疗前冻存精子,由于恶性肿瘤治疗方法的进步,患者预期存活期大大提高,可能存在生育要求,而肿瘤的放化疗可能严重影响精子的数量和质量,因此对癌症治疗前的患者利用精子库来保存男性生育能力是一种有利的生殖保险手段。对于从事影响生育力的工作(如接触有毒物质、放射线)的男性,也可以提前将精液冷冻。kMW试管婴儿网

5手术获取精子的保存。通过手术取精的患者常常会要求进行精子冷冻。睾丸姐织活检取精或是经皮附睾穿刺精子抽吸的精子冷冻后,便于在治疗周期中不需要再次手术取精,或者预防下次取精失败。kMW试管婴儿网

(二)精子冷冻的方法kMW试管婴儿网

目前,精子冷冻最成熟的方法为程序冷冻法。kMW试管婴儿网

精子冷冻前需要进行计数,因此,所需的设备除程序冷冻仪外,还需要精子计数装置。kMW试管婴儿网

精液取出液化后应该尽早进行冷冻,对精液进行冷冻处理一般在取精后1小时之内。冷冻前的精子活率及正常形态率越高,复苏后精子的活动率越高。但是由于精液冷冻方法的不稳定性,以及大家对其重视程度不足,精子复苏率究竟和哪些因素相关性最大并无定论。kMW试管婴儿网

精子冷冻也首先包含了脱水的过程,使用的冷冻液中含有的冷冻保护剂主要为甘油,也有的配方使用甘油复合制剂,添加了卵黄、枸橼酸钠、抗生素等物质。目前有多种市售的精子冷冻液可以选择。甘油在精液中的最终浓度通常选用9%10%。甘油过高时会引起精子顶体、颈部的损害以及尾部的弯曲。冷冻液原液的甘油浓度通常比终浓度高2倍。添加冷冻液原液前应该准确测定精液的量,以便确定所需的冷冻液原液量。添加原液时,应缓慢添加,边滴边搅拌,约1分钟滴完。然后经过充分混匀后分装入冷冻容器。经过脱水后的精子,细胞内渗透压增加,但精子往往还有运动能力。kMW试管婴儿网

脱水后将精子装入容器冷冻,常用的冷冻容器包括1.8ml冷冻管或麦管。1.8ml冷冻管容积较大,便于保存比较多的精液,但由于管壁较厚,植冰效果稍差,而麦管正相反,植冰效果好而容积太小,所以应该根据治疗的需求和患者精液的实际情况来选择。kMW试管婴儿网

在冷冻降温过程中随着温度的不断下降,细胞外液形成细小的冰晶,使细胞外液的电解质浓度增加,随着脱水的进行,精子逐渐皱缩而在细胞内不产生或只产生少量的冰晶。其中如前所述,在-6-5,需要植冰来打破溶液的过冷状态。随后降温至-8℃左右可以直接进入液氮中保存。kMW试管婴儿网

(三)冷冻精液的复苏kMW试管婴儿网

有关冷冻精液的复苏,相关的研究并不多,复温可以采用的方法包括室温下空气中复苏,水浴复温,有的中心将标本握在手中复温。哪种复温方法对精子复苏存活率最好并没有定论,但有的研究提示,37℃下水浴快速复苏的精子的活率高于室温下复苏。理论上,快速复温可能防止因慢速复苏造成细胞内重结晶而损伤精子。kMW试管婴儿网

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