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体外培养的污染及处理

作者:朱桂金 来源:人民卫生出版社 2015-08-29 17:19:30

核心提示: 1.7 体外培养的污染及处理IVF培养液的污染虽然不多见,但由于精液和卵泡液均不是无菌的,培养液中加入的血清也可能存在病毒,因此IVF培养系统存在污染的可能性。污染的微

       1.7 体外培养的污染及处理BZkIVF导航

IVF培养液的污染虽然不多见,但由于精液和卵泡液均不是无菌的,培养液中加入的血清也可能存在病毒,因此IVF培养系统存在污染的可能性。污染的微生物可为细菌、原体、病毒。由于污染可能导致胚胎死亡,使患者不能进行胚胎移植,给患者造成极大的损失,因此需要了解污染可能的来源并积极预防,以减少污染的发生。BZkIVF导航

1.7.1 污染的发生率和菌种BZkIVF导航

IVF培养室的污染发生率较低,同济医院报道的发生率为0.27%0.6%,据德国IVF中心报道,污染率为1/10001/100BZkIVF导航

大肠杆菌、酵母菌和真菌是最常见的污染菌。同济医院发现38例胚胎污染中,大肠杆菌占57.9%,其次为真菌占13.2%。其他少见,包括肺炎克雷伯杆菌、(G-杆菌、铜绿假单胞菌、雷极变形杆菌、G-球菌、G-球菌、肠杆菌等。BZkIVF导航

1.7.2 培养系统污染的来源BZkIVF导航

精液、卵泡液都不是无菌的,因此,培养系统的污染可来自精液、卵泡液、血清。其中革兰阴性杆菌如大肠杆菌变形菌、克雷伯菌(Klebsiella)、假单胞菌(Pseudomonas),污染源几乎总是来自精液。 酵母菌特别是念珠菌也来自精液,虽然也可来自卵泡液。真菌,如曲霉菌、青霉菌,一般来自培养箱或培养室环境。BZkIVF导航

  (一)来源于精液BZkIVF导航

精液是培养液污染最可能的来源。同济医院发现38例污染中,10例污染菌种与受精的精液培养的菌种相同,直接证实污染来自精液。此外,2例真菌污染来自同一份供精标本,也提示污染来自精液。其他间接证据包括与精液接触时间短者没有污染,如ICSI没有污染,所有的38例污染均为IVF;同一患者的ICSI胚胎没有污染,而IVF形成的胚胎有污染;同一患者受精2小时的胚胎无污染或污染较轻而与精液过夜受精的胚胎有污染。上述资料均提示精液是污染的主要来源。BZkIVF导航

精液含有细菌,大量的文献报道,无症状男性精液原液微生物培养阳性率为50%100% 50% 的病例每毫升有1000个以上,多数为非致病菌。最常见的细菌有表皮葡萄球菌(63%),绿色链球菌(28%),大肠杆菌(9%),金黄色葡萄球菌(5%),粪链球菌(5%),溶血链球菌(4%),聚团肠杆菌(4%),其他(4%)。也有文献报道最常见的细菌为肠球菌占73% 。还有文献报道最常见的为解脲支原体,其次为沙眼衣原体。同济医院对30例进行IVF男性的精液原液进行培养,阳性率为96.7%29/30)。其中前3位者为凝固酶阴性葡萄球菌,G+球菌和粪肠杆菌,其他有G-杆菌、G+杆菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、奇异变形菌等。BZkIVF导航

精液的污染可来自男性尿道。尿道正常菌丛有白色葡萄球菌、类白喉杆菌、非致病性分枝杆菌。精液是由附睾的精子、精囊腺、前列腺和尿道球腺的分泌物组成,虽然正常情况下每个部分都是无菌的,但是射精时精液通过尿道,可能被尿道的菌丛污染。男性尿道常有微生物寄居,如需氧菌、厌氧菌、醉母菌、生殖道支原体(解脲支原体和人型支原体),除了这些常见的菌丛外,也能见到致病菌和潜在致病微生物如淋球菌、沙眼衣原体、滴虫等。Cottle取男性前段、中段尿和精液进行细菌培养,细菌的阳性率分别为37%27% 51% ,大多数为尿道中常见的革兰阳性菌。Willen也证实,44%精液中发现的细菌和58% 前列腺中发现的细菌与尿道的细菌相同,冠状沟中71%的细菌与尿道相同,提示精液的细菌来自男性尿道。BZkIVF导航

虽然菌精症常见,但发现的微生物很少重复,而且精液中存在的细菌与白细胞的浓度无关,这些结果均提示,精液中的细菌很大部分来自尿道寄居细菌的污染,而不是活动感染。BZkIVF导航

精液中的细菌除来自尿道外,还可能来自皮肤菌群的污染。皮肤正常菌丛有葡萄球菌、类白喉杆菌、绿脓杆菌、非致病性分枝杆菌、白念珠菌、丙酸杆菌。Stovall等报道80% 的精液培养至少分离出一种细菌,而最常见的4种细菌中,3种为正常皮肤菌群,提示在取精的过程中,手和外阴等部位的细菌可能污染精液。

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