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培养方式

作者:何方方 来源:人民卫生出版社 2015-08-29 17:24:33

核心提示: 1.6 培养方式1.6.1 无油覆盖培养与有油覆盖培养在胚胎培养中应用油的原因包括:在大气压下观察胚胎时有助于维持pH稳定,保护培养基无菌,防止蒸发,尤其是微量液滴时。另外

     1.6 培养方式RyU试管婴儿网

1.6.1  无油覆盖培养与有油覆盖培养RyU试管婴儿网

在胚胎培养中应用油的原因包括:在大气压下观察胚胎时有助于维持pH稳定,保护培养基无菌,防止蒸发,尤其是微量液滴时。另外,有或无油可能对培养基中的实际氧分压产生极深的影响。细胞氧气利用率的维持部分依赖于培养系统中的氧气的溶解度和扩散率。如果油层限制了大气和培养基之间的气体交换,它可能有助于在细胞周围维持一种有利的、低氧(通过呼吸产生)的微环境。另外一种可能性就是油能够作为聚集于液体环境中的毒性物质的洗涤槽。与未盖油的培养基相比,囊胚形成率在盖油的微滴培养基中明显高。RyU试管婴儿网

平衡好的矿物油有特殊的作用:作为一个物理屏障,阻断培养液微滴和环境以及空气传播的微粒和病原菌之间的结合,防止挥发和减慢气体的扩散,因此在配子操作过程中可以保持pH、温度和渗透压的稳定,防止胚胎所在微环境的过大波动。防止蒸发,高湿度和预平衡的矿物油也可以放在无湿度的培养箱中,更易于清洁和保持。RyU试管婴儿网

另外,矿物油能吸收培养基中的脂溶性毒物,有利于胚胎的发育。由于油的物理特性导致了气体的挥发缓慢,所以应该提前平衡,不提前平衡的油能够从培养基中吸收气体,造成偏碱的pH,对配子和胚胎有不利影响。覆盖有油的培养小皿必须放在培养箱内平衡1小时以上才能将配子或胚胎移入其中。RyU试管婴儿网

1.6.2 结合培养与单胚胎培养 RyU试管婴儿网

  (―)单胚胎培养RyU试管婴儿网

在一定条件下。单个胚胎在体外培养系统中也能生存和增殖生长,有很强的独立性。采用单胚胎培养比较便于观察,有连续性。在进行单个胚胎培养时应进行微滴培养,并且盖油。RyU试管婴儿网

(二)集合培养RyU试管婴儿网

集合胚胎培养是指在培养基内将多个胚胎一起培养,培养液的景相对多,一般为1ml左右。这种方式中由胚胎分泌的一些代谢物质会被稀释变得无害。单个胚胎虽然能生长繁殖,但不如结合胚胎生存力强,胚胎量多时比少时易于培养。鼠胚试验已经证实当10个左右的胚胎一起培养,可以获得更好的卵裂率及囊胚形成率。6个月内,72名可获得9个及更多受精卵的患者参加了这项前瞻性研究。一共936个受精卵被分成三个亚组(单独培养、相邻很近的单独培养以及结合培养),均被置于30μl的液滴(第3天换培养液)中培养直到嚢胚形成。第5 天,进行单囊胚移植并且其他高质量的囊胚玻璃化冷冻保存。IVF的受精率为69% ICSI的受精率为81%。囊胚形成率为48% 。单囊胚移植的临床妊娠率为54% 。结合共培养与单独培养相比,在致密化率(p<0.01)及囊胚形成率(P<0.01)方面均更有优势。结合共培养租获得的囊胚治疗更好(P<0.05)。随之而来的是,结合培养组的囊胚获得了更多的活产率。就目前所知,这是第一份证据证明结合培养可以改善人类胚胎植人前发育并建议可以减少培养液的体积或者增加胚胎的密度。RyU试管婴儿网

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