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培养液的组分

作者:金美善 来源:人民卫生出版社 2015-08-31 11:18:11

核心提示: 1.2 培养液的组分胚胎培养液包括如下组分:․水․无机盐类 ․碳水化合物 ․氨基酸 ․维生素 ․核酸前体 ․螯合剂 ․抗氧化剂 ․杭生素 ․大分子物质 ․激素和生长因子․缓

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胚胎培养液包括如下组分:dnD试管婴儿网

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无机盐类 dnD试管婴儿网

碳水化合物 dnD试管婴儿网

氨基酸 dnD试管婴儿网

维生素 dnD试管婴儿网

核酸前体 dnD试管婴儿网

螯合剂 dnD试管婴儿网

抗氧化剂 dnD试管婴儿网

杭生素 dnD试管婴儿网

大分子物质 dnD试管婴儿网

激素和生长因子dnD试管婴儿网

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在本章节里会对每一组分对胚胎发育的影响依次进行讨论。dnD试管婴儿网

(―)水dnD试管婴儿网

占培养液总体成分99% 的水是培养液的最基本的组成成分。配制培养液所用的水的纯度和质量会直接影响培养液的质量和表现,进而决定在该培养液中培养的胚胎的活力和命运。比如,2细胞小鼠胚胎的发育在用经过3次蒸馏的水配制的培养液中培养效果优于用经过两次或一次蒸馏的水配制的培养液中的培养效果,这说明,水的质量对胚胎培养是有影响的。dnD试管婴儿网

目前常用的制造纯化水或注射用水的方法有蒸馏法、离子交换法、反渗透法、滤膜过滤法、滤膜过滤法等。如果一个生殖中心的实验室要自行配制培养液或冷冻用液等胚胎处理液,为确保所用水的质量以避免对胚胎的不利影响,所选用的水最好是符合中国和国际药典规定的灭菌注射用水而不是单纯的纯化水。关于中国、美国和欧盟药典对纯化水和注射用水的标准,包括水的来源、性质、pH、重金属最大允许值、内毒素含量、总有机碳、电导率、微生物限度等请见表6-6dnD试管婴儿网

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   (二)无机盐类dnD试管婴儿网

胚胎培养液的无机盐包括钠、钾、钙、镁、氯化物、磷酸盐、硫酸盐、碳酸盐等,它们是维持培养液渗透压的主要成分。dnD试管婴儿网

由于无机盐离子与氨基酸、蛋白质和碳水化合物,以及无机盐离子之间均存在相互作用,每一离子组分对胚胎发育和活力的影响并不容易阐明。如小鼠胚胎在含0.448mmol/L钾离子、09.6mmol/L镁离子、0.110.2mmol/L钙离子及07.2mmol/L 磷酸盐溶液中均可生长。仓鼠的胚胎也可以在不同浓度的钠、镁、钙和钾的环境中,从第一次卵裂或2细胞期开始发育成囊胚。但更多的研究表明,高浓度氯化钠对小鼠囊胚培养是有害的,当将其浓度降至85mmol/L时,小鼠卵裂期胚胎可以提高mRNA和蛋白质的合成率。dnD试管婴儿网

培养液中的镁离子对2细胞胚胎至囊胚的培养似乎不起关键作用,但镁离子参与构成细胞间质。钙离子被证明对桑葚胚的致密化至关重要。两种离子除参与细胞的各种生理活动之外,还可以使细胞互相连接。目前,广泛用于对卵裂期胚胎的植入前遗传学诊断的培养液设计即基于这个原理。这一培养液不含有钙、镁离子,因而当将待进行PGD的卵裂期胚胎放入短时培养时,卵裂球之间的密切连接时以变得松散,用活检针取出一个卵裂球时不易破坏邻近的卵裂球。当将胚胎转移至正常培养液中培养时,卵裂球间的连接蛋白又可以恢复正常功能使胚胎发生去致密化进而使胚胎正常发育。

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